DBD-NCS [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-isothiocyanato-2,1,3-benzoxadiazole] [for HPLC Labeling and Edman Degradation]

　1は2,1,3-ベンゾオキサジアゾール骨格とイソチオシアノ基を有するHPLC用蛍光ラベル化剤で，アミノ基と速やかに反応し，チオ尿素誘導体を形成する。このチオ尿素誘導体は安定で，逆相HPLC条件下で分解することなく検出器に到達する。λex 384 nm，λem 520 nmで蛍光検出測定することにより，良好なクロマトグラムが得られる。その検出限界(S/N=3)はサブピコモルオーダーである。1自体は無蛍光で，結晶および溶液状態での安定性に優れており，誘導体の安定性も良い。ペプチド，タンパク質のN末端アミノ酸と結合後，酸処理することによりアミノ酸配列分析（エドマン分解）に利用できる。

応用例
　＜手動エドマン分解による方法＞
　ペプチド(Insulin Chain B 500 pmol)
　　　│
　　　│　・ 50% ピリジン / 水 20 µLに溶解する。
　　　│　・ 1% トリエチルアミン / アセトニトリル 5 µLと20 mM ラベル化剤1/ ピリジン10 µLを加え，不活性ガス雰囲気下，
　　　│　　　50 ℃，15分間反応させる。
　　　│　・ 室温まで冷却後，反応液をn-ヘプタン / ジクロロメタン(6/4)で200 µL×3回洗浄する。
　　　│　・ 洗浄処理した溶液を遠心エバポレーターを使用して50 ℃ 15分で乾固する。
　　　│　・ 1% BF₃・Et₂O / アセトニトリル 30 µLを加え，50 ℃，5分間反応させる。
　　　│　・ 窒素気流により反応液を乾固する。
　　　│　・ 20 µLの水を加え，ベンゼン / 酢酸エチル(1/4) 100 µL×2回抽出する。
　　　│
　　　│―――――（水層）～ペプチド
　　　│
　　（有機層）
　　　│
　　　│　・ 窒素気流により抽出液を乾固する。
　　　│　・ アセトニトリル 2 µLに溶解する。
　　　│　・ 0.4 M 塩酸 8 µLを加え，50 ℃，5分加水分解する。
　　　│　・ 反応液を室温下，10分間，4 M 塩酸 5 µLと0.5 M 亜硝酸ナトリウム5 µLで処理することにより酸化する。
　　　│　・ 1 M 炭酸水素ナトリウム 23 µLで中和し，0.15 M メチオニン 20 µLを加え，過剰の酸化剤を除く。
　　　│　　
　　20 µLをHPLC試料とする

製品パンフレットはこちら
HPLC用ラベル化剤 ( PDF 4.1MB )