バイオフィルム用透明化試薬

製品

T4031: Clearing Reagent iCBiofilm-H1 [for Biofilm]
T4032: Clearing Reagent iCBiofilm-H2 [for Biofilm]
I1275: Clearing Reagent iCBiofilm-D [for Biofilm]

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特長

本製品を添加するだけでバイオフィルムを透明化
様々な菌種のバイオフィルムに適用可能
透明化後のバイオフィルムは、光シート顕微鏡(LSFM)や共焦点レーザー顕微鏡(CLSM)によって3次元で観察可能
iCBiofilm-D（製品コード：I1275）を用いることで、バイオフィルムのライブセルイメージングが可能

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iCBiofilm-H1およびiCBiofilm-H2を用いて透明化した後の観察例

PBSまたはiCBiofilm-H1を加えて撮影したMRSAの画像 — 図. メチシリン耐性黄色ブドウ球菌MRSAを37°Cで一晩培養後、室温で30分間固定し、FM^Ⓡ1-43により4°Cで一晩染色し、洗浄後にPBSまたはiCBiofilm-H1を加えて撮影した画像
（FM^ⓇはThermo Fisher Scientific Inc.の登録商標です。）

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iCBiofilm-H1およびiCBiofilm-H2を用いた透明化方法

iCBiofilm-H1（製品コード：T4031）は多くのバイオフィルムを透明化させるのに適した試薬です。iCBiofilm-H1での透明化が弱い場合、iCBiofilm-H2（製品コード：T4032）をお使いください。iCBiofilm-H2は高い成分濃度で調製されているので、使用直前にイオン交換水で適宜希釈してください。希釈割合は、iCBiofilm-H2 : イオン交換水 = 1 : 1 - 2 : 1です。iCBiofilm-H2を希釈せずそのまま添加してうまく透明化する場合もあります。

＜透明化手順＞

バイオフィルムを形成する微生物を用意する。
直径35mmのガラス底培養皿にバイオフィルムを形成させる。
培養皿から培地を取り除き、PBSで希釈した1%グルタルアルデヒド溶液を加えて固定する。免疫染色を行う場合は、抗原性を保持するためにPBSで希釈した4%パラホルムアルデヒド溶液を加えて固定する。
固定液を取り除き、PBSまたはイオン交換水で3度洗浄する。
細胞を染色する場合は、ここで染色液を加えて染色する。
染色液を取り除き、iCBiofilm溶液を加える。
顕微鏡で観察する。

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iCBiofilm-H1およびiCBiofilm-H2を用いた透明化例の動画

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iCBiofilm-Dを用いて透明化したバイオフィルムのライブセルイメージング例

＜透明化手順＞

ライブセルイメージング用培地の作製：通常培養する濃度の2倍となるようにBrain Heart Infusion（BHI）粉末と終濃度2%となるようにグルコースの粉末を脱イオン水に溶解し、フィルター滅菌する。その後に、等量のiCBiofilm-D（製品コード：I1275）と混合し、1%グルコースを含むBHI培地（半分の濃度のiCBiofilm-D入り）を作製する。
工程1で作製したライブセルイメージング用培地にMitoTracker® Deep Redを添加し、ガラスボトムディッシュでメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）を培養する。
顕微鏡で観察しタイムラプス画像を取得する。

（MitoTracker^ⓇはThermo Fisher Scientific Inc.の登録商標です。）

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ライブセルイメージングの画像取得例の動画

＜注意事項＞

iCBiofilm-Dをそのままの濃度で用いる場合、脆弱なバイオフィルムの形成を妨げることや、明瞭な撮影像が得られないことがあります。その際は、iCBiofilm-Dを上記の透明化手順で2倍に希釈してご使用ください。なお、iCBiofilm-Dをそのままの濃度で用いる場合は、ライブセルイメージング用培地は通常の生育培地の作製方法で、溶媒（脱イオン水）をiCBiofilm-Dに置き換えて作製してください。

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本製品は、杉本真也准教授らの技術指導により製品化されました。
図および動画は、杉本真也准教授からご提供頂いたものです。

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