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エンドグリコセラミダーゼ（EGCase）はスフィンゴ糖脂質に特異的に作用し、糖鎖と脂質の間のグリコシド結合を加水分解する酵素です。
伊東らが開発した放線菌Rhodococcus由来エンドグリコセラミダーゼは、界面活性剤の存在下で糖脂質をオリゴ糖と脂質（セラミド）に加水分解するエンド型です1)。リコンビナント化されたrEGCase II（製品コード：R0242）は、細胞から破砕抽出した糖脂質由来の糖鎖構造解析用サンプルを調製する際に用いられ、酵素発見から現在まで実績があります2)。また、rEGCase I（製品コード：R0240）は、植物性グルコシルセラミドにも作用して、セラミドを遊離することができます3)。一方、界面活性剤を添加できない生細胞の細胞表面オリゴ糖を切り出す場合は、界面活性剤の代わりになる酵素活性化タンパク質（Activator II）との混合製品である、アクティベーターII支援型のrEGCase II（製品コード：R0243）やrEGCase I（製品コード：R0241）が有効です4,5)。
製品
- R0240
- rEGCase I
- R0242
- rEGCase II
- R0241
- rEGCase I assisted by Activator II
- R0243
- rEGCase II assisted by Activator II
本製品は九州大学からのライセンスを受けて製品化したものです。
EGCaseの作用（Ganglioside GM1を例に）
EGCaseを用いたGM1の加水分解反応例
EGCaseは界面活性剤の存在下において活性を示します。
Activator IIは界面活性剤非存在下でEGCaseを活性化するタンパク質であり、EGCaseと組み合わせることで生理的条件下での使用が可能となります。
rEGCase IおよびrEGCase IIの基質特異性
Each substrate (4 nmol) was incubated with EGCase and 0.1% Triton™ X-100 at 37°C.
これらのデータは九州大学 伊東信教授および石橋洋平博士からご提供いただきました。
EGCase Iを用いた天然クルード産物中の糖脂質に対する切断・分析例
サンプル ： 植物由来糖脂質抽出物
植物由来糖脂質抽出物にはグルコシルセラミドを中心としたスフィンゴ糖脂質の混合物である天然のセラミドが含まれ、スフィンゴシン・脂肪酸の炭素数の違い、二重結合の有無等により分子種に多様性があります。
本法ではそれら複数の分子種をEGCase Iにより一斉に加水分解しており、質量分析により、加水分解による単糖の遊離に相当する分子量が変化していることが確認されます。
参考文献
- 1) A Novel Glycosphingolipid-degrading Enzyme Cleaves of the Linkage between the Oligosaccharide and Ceramide of Neutral and Acidic Glycosphingolipids
- 2) Purification and Characterization of Glycosphingolipid-specific Endoglycosidases (Endoglycoceramidases) from a Mutant Strain of Rhodococcus sp.
- 3) Preparation and characterization of EGCase I, applicable to the comprehensive analysis of GSLs, using a rhodococcal expression system
- 4) Specific hydrolysis of intact erythrocyte cell‐surface glycosphingolipids by endoglycoceramidase. Lack of modulation of erythrocyte glucose transporter by endogenous glycosphingolipids
- 5) Kinetics of endoglycoceramidase action toward cell‐surface glycosphingolipids of erythrocytes
